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Pourquoi utiliser des tampons en HPLC?

Pourquoi utiliser des tampons en HPLC?

Chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC) est un moyen commun d'analyse chimique instrumentale. Un élément essentiel de toute méthodologie de CLHP est le solvant particulier de la phase mobile utilisée pour dissoudre et transporter les produits chimiques de l'analyte. De nombreuses phases mobiles sont tamponnées pour contrôler les changements de pH et de veiller à ce que la méthode d'essai donne des résultats fiables et précises.

Tampons


Un tampon est une solution de solvant spécialement formulé qui présente que de faibles variations du pH lorsque des acides forts ou des bases y sont ajoutés. Les tampons sont préparées en dissolvant une base faible et de son acide conjugué ou un acide faible et sa base conjuguée, dans un solvant. Lorsque des acides ou des bases sont ajoutés à un tampon, l'équilibre acido-basique existant déjà dans la solution compense automatiquement l'addition, de sorte qu'il existe relativement peu de changement dans le pH de la solution.

Tampon et ionisables composés chimiques


HPLC peut être utilisée pour analyser des composés chimiques ionisables. Ce sont des composés qui peuvent facilement former des ions en solution, tels que des acides carboxyliques. De manière générale, ces composés devraient être analysés dans leur état non ionisé, où ils présenteront un comportement cohérent en termes de leur solubilité et les interactions avec les matériaux d'emballage de colonnes HPLC. Tampons permettent la phase pH mobile pour être "verrouillé" dans une certaine gamme spécifique où les espèces d'intérêt est connu pour être dans son état non ionisé. En outre, des tampons résistent changements locaux de pH causés par les composés eux-mêmes.

Général Buffer utilisation


Tampons doivent être utilisés chaque fois qu'une espèce ionisable est l'analyte. Ceux-ci comprennent des acides organiques tels que l'acide sorbique et l'acide benzoïque. Bases organiques contenant des groupes fonctionnels amine devraient également être analysés en utilisant des phases mobiles tamponnées. Des exemples de telles bases organiques comprennent de la nicotine et de la méthamphétamine. Phases mobiles tamponnées peuvent également être utilisés lors de l'analyse des composés non-ionisables afin de forcer contaminants dans leur forme soit ionisé ou non ionisé, tel que requis pour se assurer qu'ils ne interfèrent pas avec l'analyse des espèces d'intérêt.

Phases Buffered mobiles communes


En général, la constante de dissociation acide, pKa, de l'espèce de tampon doit être proche du pH désiré pour le tampon. En outre, la phase mobile doit normalement être d'au moins la moitié de l'eau pour une utilisation avec des espèces tampons inorganiques. Pour les faibles valeurs de pH au voisinage de 2 à 3, le système de mémoire tampon la plus courante consiste en sels de sodium ou de potassium de l'acide phosphorique. Si un tampon volatil est nécessaire, l'acétate ou le formiate peuvent être utilisés. Une gamme typique de la concentration d'espèces de la mémoire tampon est de 10 à 50 millimoles par litre.




        

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