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Qu'est-ce que l'éthanol faire dans une extraction de l'ADN?

Qu'est-ce que l'éthanol faire dans une extraction de l'ADN?

extraction de l'ADN est d'une importance capitale dans la recherche biochimique, la science médico-légale, de la génomique et de la protéomique. Il existe plus d'une voie pour effectuer l'extraction d'ADN, par exemple, on peut réaliser le procédé de manière organique, qui consiste à utiliser l'éthanol dans l'étape de précipitation de l'ADN, ou d'une manière non-organique, ce qui implique l'utilisation de chlorure de lithium. Pour les fins du présent article, nous allons discuter de la fonction d'éthanol et de son importance dans cette technique largement utilisée.

Simple panne de l'extraction de l'ADN


Dans l'extraction d'ADN, nous réalisons d'abord un certain nombre d'étapes avant l'inclusion de l'éthanol. Séquentiellement, nous devons briser la cellule, en utilisant un tampon de lyse cellulaire. Après cela, on utilise éthylènediaminetétraacétique sel disodique (EDTA) à retirer la membrane. Lorsque cette étape est terminée, nous utilisons Proteinase K pour éliminer les matières protéiques. A ce stade, l'éthanol glacé à 95% est introduit. Ce est là que la précipitation d'ADN commence vraiment. Pour comprendre comment fonctionne l'éthanol, nous devons nous familiariser avec des termes biochimiques de base, comme la polarité et constantes diélectriques.

La polarité et la solubilité


ADN est polaire, ce qui rend soluble dans l'eau. L'eau est également très polaire. Cela se rapporte à la «comme-dissout-comme" la théorie, selon laquelle la solubilité est basée en grande partie sur chimique similaire maquillage entre un soluté et un solvant. Cependant, l'éthanol est moins polaire que l'eau. Cela signifie qu'il a une constante diélectrique inférieure. L'eau a une constante diélectrique élevée de 80,1. L'éthanol est une constante inférieure, de 24,3. Autrement dit, l'ADN ne peut pas dissoudre dans de l'éthanol car l'ADN est différent dans sa structure à l'éthanol.

Ethanol fonctionne avec de l'acétate de sodium


Sucre-phosphate l'épine dorsale de l'ADN est chargé négativement. Pour la précipitation d'ADN au travail, l'éthanol a besoin de la présence d'ions chargés positivement (cations) tels que le sodium (Na +) sels. acétate de sodium est utilisé en routine dans l'extraction d'ADN. Pour optimiser le rendement de l'ADN acquise, il est important de considérer combien acétate de sodium est ajouté. Des quantités excessives d'ions sodium équivaut à précipiter l'excès de sel avec l'ADN. Inversement, le rendement de l'ADN a gagné est pauvre se il ne est pas assez de sel. éthanol à 95% de glace froide, plus les sels neutralise la charge négative.

La constante diélectrique est abaissée


Qu'est-ce que l'éthanol faire dans une extraction de l'ADN?

L'éthanol diminue la constante diélectrique et cet effet se intensifie les interactions entre les cations et les acides nucléiques chargés négativement. La nature non polaire de l'éthanol neutralise les acides nucléiques, qui précipitent ensuite dans la solution. En outre, l'éthanol induit des interactions entre les phosphates affaiblies chargés négativement et les polymères d'acide nucléique. Cela donne lieu à une agrégation d'ADN. Ce précipité d'ADN peut ensuite être récupéré après centrifugation de l'échantillon à pleine vitesse. Votre ADN est maintenant prêt pour un examen plus approfondi et le stockage ultérieur.




        

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